란테의 성장 노트

오늘은 실험을 사용하는 플레이트별로 배지나 용액의 양이 몇 ml이 적당한지 알려 드릴게요plate volume! 저희 실험실에서 제가 사용했던 양이고, 직접 실험을 한 두 번만 해 보시면 바로 어느 정도가 적당 할지 느낌이 오실 겁니다그래도 한 번도 실험을 안해봤거나 초반에 시행착오를 줄이고 싶은 분들이라면 참고 하시면 좋을 거 같아요1. 6well plate기본 : 2ml,  최대:4ml (비추) Hek293 기준 10 만cell2. 12well plate기본 :  1mlHek293 기준 4만 cell3. 8well plate기본 :  200uLHek293 기준 1.3만 cell4. 24well기본 : 500uLHek293 기준 2만 cell5. 96well plate기본 : 100uL 대략 이정도 p..

안녕하세요, 란테입니다. 졸업하고 한참~뒤에야 작성하는 셀 시딩하는 방법, 셀 개수 세는 방법입니다.재학당시에 찍어둔 사진이용해서 설명드려볼게요~ Cell seeding, cell counting , 셀 깔기, 셀 시딩, 세포 수 세기 다 같은 말인거 아시죠~?ㅎㅎ꼭 동물세포 아니더라도 미생물도 유사한 방식으로 셉니다!저는 동물세포 이용해서 실험진행했어서 배지 색이 붉은색이에요~ 방법. 함께 해봅시다1. 필요한 총 세포 수 계산하기Cell seeding (셀 깔기)를 위해서는 먼저 얼마만큼의 세포를 쓸껀지, 나는 지금 얼마만큼의 세포가 있는지 세포수를 세어서 알아야겠죠?실험실마다 다르겠지만, 이번에 제가 사용할 well은 8well plate로 한 칸에 1.3만cell 이면 충분했어요. 4칸만 채워볼게요..

subculturing, 계대배양 1. 노란색으로 변한 배지를 꺼내서 위에 배지를 석션, 버린다 2. PBS로 washing 해준다. 3~4ml (안하면 트립신으로 떨어지지 않음. FBS 가 트립신 작용을 막기 때문) 3. 트립신/EDTA를 100파이 plate 한 개당 1ml 따서 넣고 인큐베이터에서 37℃로 1~3분 정도 기다린다. (이때 손으로 plate 의 옆면을 탁탁 쳐주면 더 잘 떨어짐) (HEK 293의 경우 1분, HCT116의 경우 3분이 경험상 적합함) 4. 배지를 4~5ml 넣고 셀이 떨어지도록 파이펫팅처럼 해준다. plate에 셀+트립신+배지를 싹 따서 코니칼에 옯겨준다. (이때 배지 바닥을 긁지 않도록 주의한다) 5. 코니칼을 원심분리하고 아래 모인 펠렛의 양을 잘 보고 배지4ml..

세포 풀기 thawing cell stock: 장기보관은 액체질소에 보관 곧 사용할 것은 -80℃냉장고에 보관 0. 클린벤치에 필요한 모든 물건들을 미리 다 꺼내둔다 1. cell stock을 냉동고에서 꺼내 water bath 에 넣고 살얼음이 보일 정도까지만 녹인다. 2. 스탁에서 녹은 세포를 따서 코니칼에 새로운 배지(약 9ml)와 녹은 스탁을 넣고 원심분리를 돌린다. (이때 배지는 많으면 좋다. DMSO가 독성을 띄기 때문에 최대한 희석하기 위해서) 3. 상등액을 석션하고 아래 남은 펠렛에 새로운 배지(약 1ml) 를 넣고 파이펫팅 한다. 4. 새 plate 에 미리 라벨링과 배지를 약 8ml 넣은 상태에서 세포를 plate 에 분주한다. 5. 인큐베이터에 넣고, 다음날 배지만 살짝 석션해 준 뒤..

셀의 종류 부착세포 adherent cell 부유세포 suspension cell primary cell :실제 생명체에서 뽑아내어 배양한 세포 cell line: subculture를 통해서 계속 배양가능한 세포 (일종의 암세포화 시킨 것) 자주 쓰이는 Cell line, 종류 및 특징 * HEK293 : 인간 배아 신장 세포, 실험실에서 치료 단백질, 바이러스 생산, 화학물질에 대한 안전성 테스트용으로 많이 사용 * HEK293T: HEK293에 SV40 large T antigen 유전자가 삽입된 세포주 * HeLa : 무한증식의 가장 오래되고 흔한 세포주. 자궁경부암환자 세포에서 유래, 내성과 증식력이 강함. 다양한 실험에 이용(암 에이즈 독성물질 여러 공산품 민감도 약물 투여 의학진단 도구 등 ..

세포 배양에 사용하는 배지의 종류 DMEM: 대표적 공통적 배지 RPMi : 일반적인 암세포에 사용 (카더라) Opti-MEM EBM2 일반적으로 실험실에서 배지 뚜껑에 쓰는 정보 S : FBS, 소 혈청 growth factor anti-anti : 항생제, 세포 오염(컨템)방지 S10 : FBS가 10% + all free + 항생제 AF: all free, (세포가 살아갈 최소한으로 구성된 배지, DNA나 RNA 넣을 때 효율 좋음) anti-anti 100: 100배가 희석되게 넣으세요 라는 의미로 항생제, 넣지 않으면 컨템이 일어날 수 있음 배지의 조성성분과 역할 *혈청(serum) FBS(fetal bovine serum): 주요 growth factor, Trypsin/ EDTA inhibi..